






一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。
2) 置換成30%的PBST溶液,染色體原位雜交,放置5分鐘
3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復(fù)一次
4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。
蛋白酶處理與后固定(本實(shí)驗(yàn)不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理,5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘,24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長(zhǎng)。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩,染色體熒光原位雜交,可以不用或者少用蛋白酶處理,發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織,以便于雜交。
2) 用PBST溶液輕洗,在PBST中放置5分鐘。
3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘,室溫。
4) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。

原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用:
生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué):在生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究生物與環(huán)境之間的相互作用。例如,通過標(biāo)記特定基因的探針,可以檢測(cè)環(huán)境中微生物種群的分布和變化,原位雜交,進(jìn)而研究其對(duì)環(huán)境的影響和作用。
進(jìn)化生物學(xué):在進(jìn)化生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究物種之間的遺傳差異和進(jìn)化關(guān)系。例如,熒光原位雜交,通過比較不同物種之間基因序列的差異,可以揭示物種之間的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。

植物組織原位雜交的步驟包括以下幾個(gè)方面:
1. 制備組織樣品:從植物中取出需要研究的組織樣品,如根、莖、葉等。
2. 固定組織樣品:將組織樣品固定在載玻片上,通常使用或乙醇等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行固定。
3. 處理組織樣品:對(duì)固定的組織樣品進(jìn)行脫水、透明化、脫脂等處理,以便于DNA探針的穿透和結(jié)合。
4. 制備DNA探針:根據(jù)需要研究的基因序列,設(shè)計(jì)并合成DNA探針。DNA探針可以標(biāo)記熒光染料或性同位素,以便于檢測(cè)。
5. 雜交DNA探針:將DNA探針與組織樣品進(jìn)行雜交,通常需要在高溫下進(jìn)行,以便于DNA探針與RNA或DNA結(jié)合。
6. 檢測(cè)雜交信號(hào):通過熒光顯微鏡或計(jì)數(shù)器等設(shè)備,檢測(cè)DNA探針與RNA或DNA的結(jié)合情況,確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。

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