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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比，DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強度較弱，因此在雜交后的洗滌中不應(yīng)使用甲醛。
探針特異性至關(guān)重要。如果已知細胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列，則可據(jù)此設(shè)計高度的互補探針。如果超過 5% 的堿基對不互補，那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著，探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去，可能無法正確檢測。
組織原位雜交(Tissue in situ hybridization），即原位雜交組織化學技術(shù)和原位雜交細胞化學技術(shù)
原位雜交技術(shù)的基本原理
利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū)，形成雜交的雙鏈。
1.兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子
2.應(yīng)用帶有標記的（有性同位素，如3H、35S、32P，熒光素、生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針，與組織切片或細胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA）片段進行雜交
3.用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位
用原位雜交術(shù)，可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。
此方法有很高的敏感性和特異性，可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調(diào)節(jié)機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
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第3年
